荧光分光光度计激发波长的选择

该怎么确定激发波长与发射波长呢？对许多仪器初学者来说，这是个令人感到困扰的问题。如果仪器有三维扫描功能，那就比较简单，放样品进去，按照说明书要求做三维荧光扫描，可以很方便地确定出合适的激发波长与发射波长。如果仪器没有三维扫描功能，一般的方法如下。
首先，将仪器的激发波长（λex）先设定为200nm，然后进行发射(EM)模式扫描，发射波长（λem）扫描范围暂设定为210-800nm，记录所有出现的峰值波长；改变激发波长（λex）后再扫描，如第二次发射图谱中的某个（或某些）峰的位置没有位移（或位移很少），一般来说这个（或这些）峰就是荧光峰；因为荧光峰的位置是不随激发波长的改变而改变的，仅是峰高（或峰面积）发生改变。
然后，将确定的荧光峰的波长作为发射波长（λex）固定下来，再做激发波长(EX)的扫描，激发波长的范围要小于发射波长；如果仅出一个激发峰则很简单确立下来，再将这个波长固定下来重新做真正的发射波长(EM)扫描，可以得到具有良好信噪噪比的结果；如果做激发波长(EX)扫描后出现几个峰，则根据经验来选择，一般应选择峰形、高度适合且有一定带宽的峰作为激发波长。也可以参考荧光光谱的特性——激发光谱与发射光谱呈镜像的特点来确定激发波长。